上海信帆生物開展了：ATP含量測(cè)試盒操作培訓(xùn)活動(dòng)

本周上海信帆生物銷售部門針對(duì)“ATP含量測(cè)試盒”開展了一系列的操作培訓(xùn)活動(dòng)，包括檢測(cè)原理，檢測(cè)意義，試劑盒組成，樣本的前處理，如何計(jì)算數(shù)值，操作步驟，計(jì)算舉例等等，通過這次培訓(xùn)，讓大家對(duì)該產(chǎn)品有了更加深刻的認(rèn)識(shí)，也明白了該試劑盒操作的一些注意事項(xiàng)，方便在以后的工作中開展活動(dòng)，也方便更加清楚明了的回復(fù)各位客戶的問題。本次活動(dòng)得到公司領(lǐng)導(dǎo)和員工的*！

ATP含量測(cè)試盒說明(100管/48樣)

一、檢測(cè)意義
    三磷酸腺苷(adenosine 5-triphosphate,ATP)是生物體內(nèi)能量轉(zhuǎn)換基本的載體,其含量的變化直接關(guān)系到各器官的能量代謝。ATP作為重要的能量分子在細(xì)胞的各種生理、病理過程中起著重要作用。ATP水平的改變,會(huì)影響許多細(xì)胞的功能。通常細(xì)胞在凋亡、壞死或處于一些毒性狀態(tài)下,ATP水平會(huì)下降,而高葡萄糖刺激等對(duì)于一些細(xì)胞可以上調(diào)細(xì)胞內(nèi)ATP水平。通常ATP水平的下降表明線粒體的功能受損或下降,在細(xì)胞凋亡時(shí)ATP水平的下降通常和線粒體的膜電位下降同時(shí)發(fā)生狀態(tài)。ATP含量測(cè)定試劑盒可以用于檢測(cè)紅細(xì)胞或組織內(nèi)的ATP水平。

二、測(cè)定原理:肌酸激酶催化三磷酸腺苷和肌酸,生成磷酸肌酸,用磷鉬酸比色法進(jìn)行檢測(cè)

三、試劑組成及配制:(100管/48樣)(本試劑盒附送雙蒸水一瓶,供客戶配試劑時(shí)使用)

注:本試劑盒中ATP 試劑三粉劑-20℃冷凍保存,其余試劑4℃保存,有效期3個(gè)月,開封后有效期為1個(gè)月。

四、樣本前處理:
1、紅細(xì)胞:抗凝全血取下層壓積紅細(xì)胞,一般按1:4的體積比加雙蒸水進(jìn)行稀釋,再     混勻使溶血*,制備成溶血液。將制好的溶血液加入玻璃試管中沸水加熱煮10分鐘,取出混勻抽提1分鐘,4000轉(zhuǎn)/分鐘離心10分鐘,取上清液待測(cè)。

2、組織樣本:準(zhǔn)確稱取組織稱重,按重量(g):體積(mL)=1：9的比例,加入9倍體積的沸雙蒸水,制成10%的勻漿液,再置于沸水浴中煮10分鐘,取出混勻抽提1分鐘,3500轉(zhuǎn)/分離心10分鐘,取上清液待測(cè)。

3、培養(yǎng)細(xì)胞:先離心處理將細(xì)胞與培養(yǎng)上清分離,除去培養(yǎng)上清,得到下層沉淀細(xì)胞(一般細(xì)胞數(shù)量達(dá)到10⁶),將收集好的細(xì)胞加入300~500uL熱雙蒸水,置于熱水浴
(90-100°℃)中勻漿破碎,后將細(xì)胞懸液于沸水浴中加熱10分鐘,取出混勻抽提
1分鐘,即可用于測(cè)定(如果存在大塊細(xì)胞碎片,需離心后取上清測(cè)定)。
注:混勻抽提1分鐘即為漩渦混勻1分鐘。

五、操作步驟:

混勻,室溫靜置5分鐘,波長(zhǎng)636nm,光徑0.5cm,雙蒸水調(diào)零,測(cè)定各管吸光度值
注:在比色前，比色皿用自來水洗10余次,再用雙蒸水洗4~5次,以免磷污染

六、簡(jiǎn)便操作表:(如果樣本量大,建議將試劑混合后再按照該表進(jìn)行操作)

1、混合試劑配制:
工作液A:   按試劑一:試劑二:試劑三=100:200:30的比例配制,現(xiàn)用現(xiàn)配,用多少配多少
工作液B:   按試劑一:試劑二=100:200的比例配制,現(xiàn)用現(xiàn)配,用多少配多少

2、混合試劑配制*后按下表操作

混勻,室溫靜置5分鐘,波長(zhǎng)636nm,光徑0.5cm,雙蒸水調(diào)零,測(cè)定各管吸光度值。

注:在比色前，比色皿用自來水洗10余次,再用雙蒸水洗4~5次,以免磷污染。

七、注意事項(xiàng):
1、此法具有微量、靈敏、快速的特點(diǎn)。對(duì)測(cè)定所用試管要求嚴(yán)格,要求不能有任何磷污染,建議使用全新一次性塑料試管,避免磷污染是檢測(cè)成敗的關(guān)鍵;

2、顯色應(yīng)用液配好后,不可放置太久,一般可保存五天,好現(xiàn)用現(xiàn)配。隨時(shí)放冰箱

3、組織勻漿宜用2%~5%濃度的勻漿上清,若樣本濃度過高,則底色過深(對(duì)照管OD過高)需稀釋后再進(jìn)行測(cè)定;一般通過做預(yù)試驗(yàn)將對(duì)照OD值控制在1.0以下

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