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上海信帆生物組織開展了:血液樣本的收集與保存的培訓(xùn)活動

更新時間:2020-09-09      瀏覽次數(shù):1231

上海信帆生物組織開展了:血液樣本的收集與保存的培訓(xùn)活動

上海信帆生物針對血液樣本的收集和保存開展了培訓(xùn)活動,希望此次的分享對大家有所幫助!

全血根據(jù)收集的條件,分成不抗凝和抗凝兩種。同時,不抗凝分離出的上層黃色的液體我們稱之為血清;抗凝分離出的上層黃色的液體我們稱之為血漿。

標本的存放溫度及時間,血清、血漿及細胞分離的方法步驟也是分析前影響檢驗結(jié)果的重要因素。抽血后,血細胞因代謝需要,要消耗掉部分營養(yǎng)成分,故對這些成分進行測定時,需及時地離心以分離掉細胞成分。

采血前個體的準備情況,如空腹時間的長短、采樣時間的確定及采血時患者的姿勢;止血帶應(yīng)用時間,輸液情況,體育運動,抗凝劑及穩(wěn)定劑的選用;標本的處理等均可影響到某些檢驗指標的水平。故標本采集過程應(yīng)標準化,以大限度地減少分析前誤差。

一、不抗凝收集血清:

1、無添加劑的干燥空管收集:

血管內(nèi)壁均勻涂有防止掛壁的藥劑(硅油)。它利用血液自然凝固的原理使血液凝固,等血清自然析出后,離心使用。主要用于血清生化(肝功、腎功、心肌酶、淀粉酶等)、電解質(zhì)(血清鉀、鈉、氯、鈣、磷等)、甲狀腺功能、藥物檢測、艾滋病檢測、腫瘤標志物、血清免疫學(xué)檢測。
    亦可直接用干燥EP管收集全血,充分靜置使得紅細胞充分自然凝固后,離心分離出血清待用或保存。

2、用促凝管收集:

采血管內(nèi)壁均勻涂有防止掛壁的硅油,同時添加了促凝劑。促凝劑能激活纖維蛋白酶,使可溶性纖維蛋白變成不可溶性的纖維蛋白聚體,進而形成穩(wěn)定的纖維蛋白凝塊,如果想快點出結(jié)果時,可采用促凝管。一般靜置半小時到1小時,直接離心分離出血清待用或保存,用于急診生化。

3、含有分離膠及促凝劑的采血管收集

管壁經(jīng)過硅化處理,并涂有促凝劑可加速血液的凝固,縮短檢驗時間。管內(nèi)加有分離膠,分離膠與PET管具有很好的親和性,確實起到隔離作用,一般即使在普通離心機上,分離膠能將血液中的液體成分(血清)和固體成分(血細胞)*分開并積聚在試管中形成屏障。離心后血清中不產(chǎn)生油滴,主要用于血清生化(肝功、腎功、心肌酶、淀粉酶等)、電解質(zhì)(血清鉀、鈉、氯、鈣、磷等)、甲狀腺功能、藥物檢測、艾滋病檢測、腫瘤標志物、血清免疫學(xué)。

    用促凝管的優(yōu)點:

、加速紅細胞的凝固,無需長時間的靜置;

、帶有分離膠,有效的將血清分離出來,更好的避免溶血;

    收集血清的缺點:

、需要紅細胞的充分凝固,所需靜置時間較長;

、分離出的血清相對較少,1ml全血不抗凝約只能分離出0.2-0.3ml血清。

二、抗凝收集血漿:

收集抗凝全血,輕輕顛倒充分抗凝后,可直接離心分離血漿待用或保存。根據(jù)不同抗凝劑的性能特征,選擇合適的抗凝劑。實驗室常用的抗凝劑有肝素的各種鹽、EDTA及枸櫞酸鈉。

 

1、肝素抗凝:

常用的抗凝劑,一般情況下對相關(guān)指標都不會有干擾,同時抗凝比例較大(抗凝劑:

全血=1:30),對血液基本沒有稀釋影響。

肝素是一種含有硫酸基團的粘多糖,帶有強大的負電荷,具有加強抗凝血酶III滅活絲

氨酸蛋白酶的作用,從而阻止凝血酶的形成,并有阻止血小板聚集等多種抗凝作用。肝素管一般用于生化及血流變的檢測,是電解質(zhì)檢測的佳選擇,檢驗血標本中的鈉離子時,不能使用肝素鈉,以免影響檢測結(jié)果。也不能用于白細胞計數(shù)和分類,因肝素會引起白細胞聚集。

盡管用肝素的三種鹽抗凝所得電解質(zhì)濃度無顯著差別,但肝素鋰還是被認為是好的。這主要是人們認為肝素鈉可使鈉的測定值偏高,肝素銨可使血氨測定值偏高(尿素酶法測定。

肝素可抑制分子生物學(xué)中常用的一些工具酶,如限制性內(nèi)切酶、Taq酶等,可影響PCR

的實驗結(jié)果??刹捎靡恍┓椒ㄏ嗡氐囊种菩?yīng),如利用肝素酶,或在分離白細胞后用緩沖液洗滌白細胞兩次以上等。然而,許多實驗工作者仍不愿意在進行分子生物學(xué)實驗時采用肝素作抗凝劑。

2、EDTA抗凝:

乙二胺四乙酸是一種氨基多羧基酸,可以有效地鰲合血液中的鈣離子,鰲合鈣會將鈣從

反應(yīng)點移走將阻止和終止內(nèi)源性或外源性凝血過程,從而防止血液凝固,與其他抗凝劑比較而言,其對血球的凝集及血細胞的形態(tài)影響較小,故通常使用EDTA鹽(2K、3K、2Na)作為抗凝劑。用于一般血液學(xué)檢查,不能用于血凝、微量元素及PCR檢查。
    由于EDTA會螯合重金屬離子,用該抗凝劑的話,部分帶有金屬離子的大分子酶都會有大量損失,具體看客戶測定的指標來選擇,做血常規(guī)的話必須用EDTA抗凝。

   3、枸櫞酸鹽抗凝:

檸檬酸鈉通過作用于血樣中鈣離子鰲合而起抗凝作用,國家研究實驗室標準化委員會(NCCLS)推薦為3.2或3.8%,抗凝劑與血比例為1:9,主要用于纖溶系統(tǒng)(凝血酶原時間、凝血酶時間、活化部分凝血酶時間、纖維蛋白原)。采血時應(yīng)注意采足血量,以保證檢驗結(jié)果的準確性,采血后應(yīng)立即輕輕顛倒混勻5-8次。由于抗凝比例較?。鼓齽喝?1:9),對血液有一定的稀釋,一般不建議。

選擇抗凝的注意點:

、每一份樣本所加的抗凝劑的量要一致,同時所取的全血的量也要盡量一致;

、收集抗凝全血后一定要輕輕顛倒,充分抗凝,防止部分血液未接觸到抗凝劑而導(dǎo)致凝固;

       、抗凝全血收集的血漿相對較多(1ml抗凝全血能分離出0.4-0.5ml血漿);

       、抗凝收集的血漿冷凍保存后,解凍時可能會出現(xiàn)絮狀渾濁,如有則需要離心去掉渾濁后

用于測定。

       血清、血漿收集好后,暫時不測定,可立即低溫凍存,溫度越低越好,中間如*凍融,-20℃以下可保存一個月,-70℃以下可保存三個月。

 

三、收集血清、血漿所用離心轉(zhuǎn)速:

   分離血清或血漿,根據(jù)種屬不同,離心轉(zhuǎn)速也有差異,推薦離心轉(zhuǎn)速為:

       、小鼠:一般1000-1500轉(zhuǎn)/分,離心8-10分鐘;

、大鼠、兔子:一般2000-2500轉(zhuǎn)/分,離心8-10分鐘;

、人:一般2500-3000轉(zhuǎn)/分,離心8-10分鐘。

四、高脂及溶血因素的影響:

溶血的影響:

溶血對某些檢驗指標的的影響不僅取決于所采用的方法,也取決于所用的分析儀器。采用雙

波長測定法可在一定程度上消除Hb的顏色干擾,然而Hb的干擾并不能*消除,尤其是當Hb可以與采用的試劑發(fā)生作用時。總的來說,輕微的溶血,對大多數(shù)研究化學(xué)指標的測定方法無明顯干擾。嚴重的溶血,可能有兩方面的影響:(1)測定成分在紅細胞內(nèi)的濃度高于血漿時,導(dǎo)致測定結(jié)果偏高;(2)測定成分在RBC內(nèi)濃度低于血漿時,產(chǎn)生輕微的稀釋效應(yīng)。

用肉眼觀察標本是否溶血只能是粗略的判斷。只有當血清中血紅蛋白濃度超過20mg/dl時,

肉眼才能見到溶血情況。有人報導(dǎo)0.1%的紅細胞發(fā)生溶血后,其血清外觀與非溶血標本一致;

1%紅細胞發(fā)生溶血后,血清清亮,呈櫻紅色,這樣的標本就代表了中度溶血。

有人建議用血清Hb濃度來對溶血程度進行判斷。非溶血標本血清游離Hb4.8±3.2mg/dl,中度溶血血清Hb為43.5±13.9mg/dl。即使輕微的溶血也可能導(dǎo)致相應(yīng)指標的測定結(jié)果偏高(如LDH、ACP、K等),這樣的標本應(yīng)盡量避免使用。

高脂的影響:

高脂血癥所產(chǎn)生的混濁對某些指標測定的影響,同樣取決于所采用的測定方法。一般而言,脂血通過樣品不均一性、水置換、親脂成分的吸收而影響檢驗結(jié)果的準確性。肉眼可見的脂血標本可影響總蛋白的測定、電泳及色譜分析等。

五、全血或紅細胞的收集及保存

        測定全血或者是紅細胞中相關(guān)指標的話,首先需要收集抗凝全血。

   全血:收集抗凝全血,輕輕顛倒充分抗凝后,可直接定量吸取全血,用冷蒸餾水制備溶血液后

用于不同指標的檢測;也可定量吸取全血,轉(zhuǎn)入EP管,低溫凍存(溫度越低越好),測定

之前解凍并按比例加入冷蒸餾水制成溶血液用于檢測。

   紅細胞:收集抗凝全血,輕輕顛倒充分抗凝后,直接離心吸走血漿,留下層紅細胞,加入3倍

體積的生理鹽水,輕輕顛倒混勻,500~1000轉(zhuǎn)/分,離心5分鐘,棄上清留沉淀紅細胞,

重復(fù)2~3次,至上清液無色為止(洗滌紅細胞)。

        、直接定量吸取紅細胞,按比例加入冷蒸餾水制成溶血液待測;

、定量吸取紅細胞,轉(zhuǎn)入EP管,立即低溫凍存(溫度越低越好),測定之前解凍,并按

比例加入冷蒸餾水制成溶血液用于檢測(解凍后部分紅細胞會破裂,因此樣本冷凍保存之

前必須進行定量)。

    溶血液的制備:定量吸取紅細胞或者全血,按比例加入冷蒸餾水,充分漩渦混勻制備溶血液

(對光觀察,溶液澄清透亮,可顯微鏡觀察紅細胞是否破裂,如未破可延長混勻時間),稀釋

成不同濃度用于不同指標的檢測。

 

上海信帆生物組織開展了:血液樣本的收集與保存的培訓(xùn)活動

 

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