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產(chǎn)品分類TECHNICAL ARTICLES
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Western blot實(shí)驗(yàn)代測,WB實(shí)驗(yàn)操作注意事項,免疫印跡(immunblotting)又稱蛋白質(zhì)印跡(western blot),他是根據(jù)抗原抗體的特異性結(jié)合檢測復(fù)雜樣品中的某種蛋白的方法。western blot是在凝膠電泳和固相免疫測定技術(shù)基礎(chǔ)上發(fā)展起來的一種新的免疫生化技術(shù)。
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所有產(chǎn)品僅供科研使用,不能用于食用和醫(yī)療等
Western blot實(shí)驗(yàn)代測,WB實(shí)驗(yàn)操作注意事項
免疫印跡(immunblotting)又稱蛋白質(zhì)印跡(western blot),他是根據(jù)抗原抗體的特異性結(jié)合檢測復(fù)雜樣品中的某種蛋白的方法。western blot是在凝膠電泳和固相免疫測定技術(shù)基礎(chǔ)上發(fā)展起來的一種新的免疫生化技術(shù)。由于免疫印跡(western blot)具有
SDS-PAGE的高分辨力和固相免疫測定的高特異性和敏感性,現(xiàn)在已成為蛋白分選的一種常規(guī)技術(shù)。免疫印跡(western blot)常用于鑒定某種蛋白,并能對蛋白進(jìn)行定性和半定量分選。
客戶需新鮮或正確保存的蛋白樣品, 檢測目的蛋白的一抗(常規(guī)指標(biāo)本公司提供一抗)。樣品要求為:
1、裂解樣品總蛋白量>500ug/樣品。
2、細(xì)胞樣品總蛋白濃度>1mg/ml。
3、組織樣品總蛋白濃度>10-15mg/ml。
Western blot結(jié)果及數(shù)據(jù)提供
內(nèi)參蛋白和目的蛋白曝光膠片各一張,可提供掃描圖,實(shí)驗(yàn)報告,包括整個試驗(yàn)流程所涉及的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)和實(shí)驗(yàn)步驟。如需進(jìn)行蛋白純化服務(wù),將提供檢測報告
Western blot實(shí)驗(yàn)服務(wù)
服務(wù)內(nèi)容
我們提供從蛋白制備、蛋白電泳到Western blot檢測的全流程服務(wù),如需要還可進(jìn)行灰度分析。
說明
1、建議提供目的蛋白陽性表達(dá)樣品(純蛋白或有陽性表達(dá)的細(xì)胞或組織)作為陽性對照。
2、每張膜檢測1-8個樣品。
3、如果一抗由客戶提供,請在正確條件下保存,避免污染及反復(fù)凍融。
western blot (WB)服務(wù)須知:
1. 樣本要求盡可能新鮮;
2. 樣本量:組織樣本,質(zhì)量大于100mg;細(xì)胞樣本,細(xì)胞數(shù)大于1×106;
3. 您可自備一抗,也可讓我公司代買。為保證質(zhì)量,抗體醉好為進(jìn)口單克隆抗體;
4. 服務(wù)時限和內(nèi)容:收到樣本之日起2-3周內(nèi)提交實(shí)驗(yàn)結(jié)果,具體包括實(shí)驗(yàn)方法、步驟、所用試劑、儀器、圖片及相關(guān)分析數(shù)據(jù)等;
5. 報告提供:實(shí)驗(yàn)結(jié)果將以電子或書面形式提交給您。
Western blot的原理
Western Blot法采用的是聚丙烯酰胺凝膠電泳,被檢測物是蛋白質(zhì),“探針”是抗體,“顯色”用標(biāo)記的二抗。經(jīng)過PAGE(聚丙烯酰胺凝膠電泳)分離的蛋白質(zhì)樣品,轉(zhuǎn)移到固相載體(例如硝酸纖維素薄膜)上,固相載體以非共價鍵形式吸附蛋白質(zhì),且能保持電泳分離的多肽類型及其生物學(xué)活性不變。
以固相載體上的蛋白質(zhì)或多肽作為抗原,與對應(yīng)的抗體起免疫反應(yīng),再與酶或同位素標(biāo)記的第二抗體起反應(yīng),經(jīng)過底物顯色或放射自顯影以檢測電泳分離的特異性目的基因表達(dá)的蛋白成分。該技術(shù)也廣泛應(yīng)用于檢測蛋白水平的表達(dá)。
Western blot實(shí)驗(yàn)代測,WB實(shí)驗(yàn)操作注意事項
為什么同一批次提取蛋白跑出的條帶不*?
這個問題很多老師在做western blotting的時候遇見過,內(nèi)參*,而目的條帶每次都不一樣,原因可能是在顯影液環(huán)節(jié),簡單來說就是你的膜沒有淋干凈,上面殘留參差不齊的T/TBS,T/TBS能稀釋顯影液,目的條帶本來表達(dá)量就少,某一個點(diǎn)殘留的T/TBS稍微多一點(diǎn)就可能導(dǎo)致顯影效果下降,所以建議在顯影液反應(yīng)前,盡量將膜上的洗膜液淋掉(當(dāng)然也不能讓膜干了,要是實(shí)驗(yàn)室富裕的話,也可以多添點(diǎn)顯影液,效果一樣)。
Western blot實(shí)驗(yàn)代測,WB實(shí)驗(yàn)操作注意事項
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