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microRNA PCR實驗代測
microRNA PCR簡介
microRNA ( miRNA )是一種機體內(nèi)源性表達的單鏈小分子 RNA ,位于基因組非編碼區(qū),本身不具有開放閱讀框( open reading frame , ORF ),具有高度保守性,時序性和組織特異性。miRNA廣 泛存在于各種真核細胞中,不編碼任何蛋白質(zhì),長度僅為20~24nt.成熟的miRNA 5端有一個磷酸基團,3端為羥基,由具有發(fā)夾狀結(jié)構(gòu)的約70 ~ 90nt的單鏈RNA前體經(jīng)過Dicer酶加工后形成。成熟的miRNA形成RNA誘導(dǎo)的基因沉默復(fù)合體( RNA-induced silencing complex , RISC )作用于靶點mRNA ,通過對mRNA剪切或抑制其翻譯過程而調(diào)控基因的表達。目前人們還不明確miRNA及其靶mRNA之間的作用機制。
microRNA PC實驗說明:
1、大部分基因特征前綴為:MIR;
2、需要確認(rèn)基因是3p還是5p;
實驗室操作注意事項:
1.實驗時根據(jù)試驗的情況和性質(zhì)進行必要的防護。根據(jù)試驗可能發(fā)生的危險事故佩戴必要的防護工具,例如穿好試驗服,戴橡膠手套,防護面具,防毒面具等。實驗前,要注意清理試驗場周圍的安全隱患。檢查試驗裝置、藥品和相關(guān)物品是否有不符合要求的情況等。
2.遵循化學(xué)藥品的性質(zhì)和化學(xué)反應(yīng)的規(guī)律,不盲目蠻干和主觀臆測化學(xué)反應(yīng)的過程。應(yīng)根據(jù)化學(xué)反應(yīng)的性質(zhì)和過程選擇匹配的反應(yīng)裝置,不可圖省事省去必要的安全措施。
3.經(jīng)常估計到實驗的危險性
實驗事故雖不可預(yù)測,但其危險性的大小是可以估計到的。即使對不大了解的實驗,也必須推測其危險程度而制訂相應(yīng)的預(yù)防措施。象下面這類實驗,必須十分注意。
①不了解的反應(yīng)及操作;
②存在多種危險性的實驗(如發(fā)生火災(zāi)、毒氣等);
③在嚴(yán)酷的反應(yīng)條件(如高溫、高壓等)下進行的實驗。
4.充分作好發(fā)生事故時的預(yù)防措施并加以檢查。
平時注意熟悉需要關(guān)閉的主要龍頭、電氣開關(guān),滅火器的位置及操作方法,避免發(fā)生事故時才四處尋找應(yīng)急的物品。
5.實驗的后處理。實驗的后處理工作,亦屬實驗過程的組成部份。特別不可忽略回收溶劑和廢液、廢棄物等的處理。
microRNA PCR實驗代測
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